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本制品是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白(MBP)标签蛋白的亲和层析介质，MBP可促进连接蛋白的正确折叠，增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBPar Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步纯化MBP融合蛋白，结合的融合蛋白可以用10mM麦芽糖进行温和洗脱，保护了目的蛋白的活性，MBP融合部分后续可用位点特异性蛋白酶切除。

本制品以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，具有更高的物理化学特性，可以耐受更高的压力，在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化，更适于工业大规模蛋白的纯化。

• 请勿冷冻保存本制品。
  
• MBPar Dextrin Agarose Resin6FF使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。
  
• 所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 本制品仅作科研用途！

• 所用水和Buffer在使用前最好用0.22μm或0.45μm滤膜过滤除菌。
  
• 结合/洗杂缓冲液：20mM Tris-HCl,200mM NaCl,1mM EDTA,pH7.4
  
• 洗脱缓冲液：20mM Tris-HCl,1mM EDTA，10mM麦芽糖，pH7.4
  注：结合/洗杂缓冲液或者洗脱缓冲液中可加入1mM DTT或10mM β-巯基乙醇。

• MBPar Dextrin Agarose Resin的装填(适用于各种中压色谱层析柱的填装)
  
  • 用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出1-2cm的去离子水。
    
  • 将树脂悬浮起来，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
    
  • 如果使用储液器，应立即在层析柱和储液器中加满水，将进样分配器放置于浆液表面，连接至泵上，避免在分配器或进样管中产生气泡。
    
  • 打开层析柱底部出口，开起泵，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流速，这样可避免液压对所形成柱床的冲击，避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速，可以用所使用泵的最大流速，这样也可以得到一个很好的装填效果。
    注：在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的75%，当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。
    
  • 关闭泵，关闭层析柱出口。
    
  • 如果使用储液器，去除储液器，将分配器至于层析柱中。
    
  • 将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器，锁紧分配器接头。
    
  • 将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中，开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。
• 样品纯化
  
  • 平衡：用5倍柱体积的结合Buffer平衡柱子，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
    
  • 上样：Resin平衡后，加入蛋白样品，使其与Resin充分接触，提高目的蛋白回收率，收集流出液。
    
  • 洗杂：用10～15倍柱体积的洗杂缓冲液进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
    
  • 洗脱：使用5～10倍柱体积的洗脱缓冲液，收集洗脱液，即目的蛋白溶液。
    
  • 清洗与保存：依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%乙醇中，置于4℃保存，防止填料被细菌污染。
• SDS-PAGE检测
  将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
  
• 填料清洗
  随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降，此时需对填料进行清洗。
  
  • 3倍柱体积的去离子水；
    
  • 3倍柱体积的0.1%SDS或0.5M NaOH溶液；
    
  • 3倍柱体积去离子水；
    
  • 3倍柱体积20%乙醇，保存于4℃。